豬活化蛋白 C（APC）酶聯免疫分析

豬活化蛋白 C（APC）酶聯免疫分析
試劑盒使用說明書
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部分 ELISA 簡介
ELISA 是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。自上
世紀 70 年代初問世 以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用 于生物學和醫學科學的許多領
域。
ELISA 的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原
或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗
滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗
原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一
定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質
的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地
放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。
第二部分 ELISA 的樣本實驗準備
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后
當天就進行檢測的樣本，及時儲存在 4℃備用。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-
20℃備用，有條件的，-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。
液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集
上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離
心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再
次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/
分）。仔細收集上清。
5. 培養細胞：檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100
萬/ml 左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。
離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再
次離心。
6. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備
用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試
劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上
清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
7. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進
行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
8. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。